产品展示
世界生命科学领域中国科研仪器设备行业领军企业
The world leader
产品中心 Products
全国统一业务咨询热线:
020-3195 4003
全国统一商务咨询热线:
020-3195 4010






地址:广州市海珠区新港西路135号中大科技园A座1104室
传真:020-8411 5724
E-mail:cleversys@163.com
产品名称: 抗体及抗体片段的纯化
产品名称:

抗体及抗体片段的纯化

上市日期: 2016-03-10
  • 产品概述
  • 产品规格
  • 详细参数

抗体是一大类能与抗原产生特异性结合的蛋白,抗体也叫免疫球蛋白(Ig)是体液免疫的重要效应分子,介导B 细胞接受抗原刺激后增殖分化为浆细胞所产生的糖蛋白。抗体的应用有:
• 治疗性应用:癌症治疗/ 免疫性疾病治疗
• 诊断应用:体内诊断/ 体外诊断/ 检测试剂
• 分析应用:酶联免疫分析/ 抗体芯片
• 结构功能研究:蛋白的结构与功能抗体结构与功能

Ig 是由两条相同的重链和两条相同的轻链通过二硫键连接而成的4 肽链分子,称为Ig 的基本结构。根据重链C 区氨基酸组成及顺序不同,将重链分为:γ、α、μ、δ、ε。根据重链组成不同,将Ig 分为五类:IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。轻链区可以分为kappa 轻链和Lambda 轻链两种类型。

 

可变区指轻链和重链中氨基酸序列变化较大的区域(V 区)。V 区位于Ig 分子的N 端,占轻链的1/2 和重链的1/4 或1/5。这种变异决定了抗体与抗原结合的特异性。恒定区是指免疫球蛋白轻链和重链中氨基酸序列较保守的区域(C区)。C 区位于Ig 分子的C 端,占轻链的1/2 和重链的3/4 或4/5;小分子抗体片段药物,因为缺乏Fc 片段仍保留着轻链及可变区,能特异性靶向结合目标分子,易于用原核系统进行表达。由于它们的分子量小,更容易的组织渗透而适合很多诊断及治疗应用。近年来小分子抗体药物产品正在快速发展。

 

QQ截图20160310113621.png

 

GE 公司针对抗体和小分子抗体片段提供高特异亲和层析技术为核心的纯化技术平台,亲和层析粗纯一步即可达到很高的纯度和回收率,对于大部分应用就已经足够。对于对抗体药物质量要求更为严格的应用,在亲和层析之后,除了可以采用离子交换,凝胶过滤等常规的高分辨率精纯技术外,还可以应用我公司新推出的高分辨率多模式填料进行精细纯化,以满足生物制药的需求。

 

一、IgG 的纯化
来源于金黄色葡萄球菌的Protein A 能特异的与IgG 的Fc 片段结合,来源于链球菌的Protein G 能特异的与IgG 的Fc 片段和Fab 片段结合。选择哪种亲和填料时请参考下表,不同种属来源的抗体对Protein A 和Protein G 有不同亲和力。

 

QQ截图20160310112537.png

 

新一代高流速高动态载量的抗体亲和家族
MabSelect 用高动态载量的刚性骨架偶联Protein A 或者耐碱的改构Protein A 具有更好的化学耐受性和寿命,并带来极高的通量,60 mg/ml 的载量是目前市面上载量最高的抗体亲和胶。

 

QQ截图20160310112647.png

 

耐碱改构的蛋白A称为SuRe配基,该配基蛋白可以耐受0.5 M NaOH 的清洗,通过显著延长填料的寿命而降低生产成本;SuRe 配基对蛋白酶稳定性更好,脱落低、洗脱pH 更加温和。

例1:用MabSelect Sure 纯化小鼠腹水来源的鼠IgG1,一步可以达到95% 以上的纯度。载量30 mg/ml。(图2)

 

QQ截图20160310112803.png

 

例2:用MabSelect SuRe 进行人源化单抗的纯化,洗脱更加温和,纯度>98%,回收率>95%,动态载量>30 mg/ml。(图3)

 

QQ截图20160310112848.png

 

二、精细纯化IgG 的方法
对于抗体药物来说,仅仅经过一步亲和层析还是不够的,在细胞培养上清中含有大量的宿主蛋白,DNA,内毒素,病毒及抗体的聚集体和脱落的亲和配基都需要通过精细纯化步骤进行去除。新型的离子交换填料Capto Q,Capto S 比传统的离子交换填料具有更好刚性和动态载量,而Capto adhere 具有多模式的结合方式,能一步将内毒素,DNA,聚集体,protein A,HCP 去除,开发出更加高效的抗体纯化两步法。

 

QQ截图20160310112955.png

 

抗体纯化平台的建立显示了多模式填料在抗体精细纯化上的应用优势。为了更有效地去除细胞培养上清中的抗体聚集体、病毒、抗体的电荷异构体、抗体片段等杂质,我们需要高选择性和高分辨率兼备的新填料,为此我们新推出Capto adhere ImpRes 和Capto MMC ImpRes 两款高分辨率的多模式填料。

多模式的强阴离子填料Capto adhere ImpRes,粒径仅为40um,比75um 粒径的Capto adhere 分辨率更高,同时具有更高的动态结合载量(图5a)和更好的抗体聚集体去除效果(图5b),在流穿模式(flow through,FT)下使用时,是抗体两步纯化中精细纯化步骤的一个新选择。不仅如此,Capto adhere ImpRes 还可以在结合/ 洗脱模式(bind/elute,B/E)下对抗体进行精细纯化,这个特性特别适合于那些具有中性或者偏酸性等电点的抗体,因为这些抗体无法使用流穿模式进行纯化,同时,Capto adhere ImpRes 的结合/ 洗脱模式的纯化方法,对抗体片段和异构体的去除特别有很好的效果。

 

QQ截图20160310113108.png

 

Capto MMC ImpRes 是一款多模式的弱阳离子填料,它继承了Capto MMC 填料可以在高盐下结合样品的特性(图6),并且在抗体精细纯化上,比Capto MMC 具有更好的动态结合载量(图7a)和聚集体去除效果(图7b)。

 

QQ截图20160310113205.png

 

三、抗体片段ScFv,Fab,Dab 的纯化

 

QQ截图20160310113244.png

 

Capto L 填料将L 蛋白偶联于高流速琼脂糖骨架,L 蛋白能特异性结合kappa 轻链的可变区,因此Capto L 也可以用于相应的IgA,IgD,IgG 和IgM 等抗体纯化,对于包括人,大鼠和小鼠在内的不同种属抗体具有亲和作用,具有高载量高纯度特点。

LambdaFabselect 填料能特异性结合Lambda 轻链恒定区,对含有Lambda 轻链的 IgA,IgE and IgM 有亲和力,一步可以达到高纯度和高回收率。

Kappaselect 填料能特异结合Kappa 轻链恒定区,对IgA,IgE and IgM 的kappa 轻链片段有亲和性,一步可以达到高纯度和高回收率。

例3:用CaptoL 从转基因动物血浆中纯化ScFv 片段,能将牛IgG 与人和鼠的IgG 有效分离,避免了牛抗体的干扰。

 

QQ截图20160310113333.png

 

例4:从大肠裂解液中纯化含Lambda 轻链的抗体片段,回收率达99%,一步纯度达89%。

 

QQ截图20160310113421.png

 

四、IgM 和IgY 的纯化

 

QQ截图20160310113457.png

 

五、特异性纯化人血清中所有IgG 亚型
IgSelect 填料专门针对人的所有IgG 亚型进行共纯化的目的而开发的,包括对Protein A 没有亲和力的IgG3。通过IgSelect 扑捉人血浆中的IgG,对纯化后IgG 亚型进行鉴定与血浆的比例完全相同。

 

QQ截图20160310113539.png

 

 

 

 

 

Copyright © 2005 - 2013 广州隆泽生物科技有限公司
犀牛云提供企业云服务
地址:广州市海珠区新港中路135号中大科技园A座1104室
电话: 86 020-31954003 020-31954010
邮箱:cleversys@163.com
邮编:330520