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产品名称: 组氨酸标签蛋白的纯化
产品名称:

组氨酸标签蛋白的纯化

上市日期: 2016-03-10
  • 产品概述
  • 产品规格
  • 详细参数

 组氨酸标签被广泛的使用,因为它们小,几乎不干扰靶蛋白的功能、活性和结构。固定的金属离子亲和层析(IMAC)是纯化组氨酸标签蛋白的最常用方法。二价金属离子螯合到亲和填料上,还可以与组氨酸等氨基酸以配位键结合,从而快速的纯化出标签蛋白。由于宿主蛋白也存在组氨酸和/ 或半胱氨酸氨基酸残基,其它的非特异蛋白与靶蛋白一起与金属离子亲和层析柱料发生结合,造成纯化样品纯度不高,在这种情况下,上样咪唑的浓度提高,换Co2+ 离子亲和或者加多一步分子筛技术都是很好的解决方法。

 

一、his 标签蛋白的纯化工具
Ni Sepharose FF 和Ni Sepharose HP具有高载量,达到40 mg/ml 填料。低Ni 离子脱落,在低浓度的还原剂存在下,脱落<5%。无需每次重新螯合上Ni2+。选择在样品缓冲液和平衡液中加入20 mM-40 mM 的咪唑能大大提高样品的洗脱纯度。

 

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TALON Superflow
比Ni 亲和结合力弱,容易洗脱,带来更高的纯度。

结合缓冲液:50 mM sodium phosphate, 300 mM NaCl, pH 7.4
清洗缓冲液:50 mM sodium phosphate, 300 mM NaCl1, 5 mM imidazole,pH 7.4
洗脱缓冲液:50 mM sodium phosphate, 300 mM NaCl1, 150 mMimidazole,pH 7.4

 

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HisTrap ™ FFcrude/HiTrap ™ TALONcrude 1 ml/5 ml ——直接结合未澄清的样品

 

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直接用注射器操作上未澄清的样品,节省40-80 分钟时间。降低目标蛋白质被降解的机会。提高低丰度蛋白的纯化回收率。每毫升凝胶结合高达40 mg 组氨酸融合蛋白质。兼容各种还原性试剂如 DTE,DTT,β-ME,变性剂如尿素,盐酸胍,去垢剂等等。

Ni sepharose excel ——直接从CHO 细胞上清中纯化蛋白减少缓冲液置换的工序,节省了时间,保持高的结合载量。

 

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IMAC sepharose 和Chelating sepharose —— 未螯合金属离子的填料

 

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His SpinTrap/His SpinTrap TALON —— 离心管柱

 

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预装了100 ul 的HP 介质,可以直接上600 ul 澄清和未澄清的样品,结合750 ug标签蛋白。用台式离心机进行纯化,仅需10 分钟。

 

His GraviTrap/His GraviTrapKitHis Buffer Kit/His GravTrap TALON —— 手工重力纯化

 

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预装了Ni SepharoseFF 1 ml 介质,上样体积不限,可以纯化40 mg 蛋白,操作时间20-30 min。kit 中包含了供20 次使用的缓冲液。

His MultiTrap FF/His MultiTrap HP/ His MultiTrap TALON—— 微孔板

 

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用于高通量筛选和多样品的平行纯化。预装了Ni Sepharose FF/Ni sepharose High Performance的介质,具有高重复性,操作简单方便快捷的特点。

 

HisPrepFF 16/10 —— 放大规模纯化

 

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预装20 ml Ni Sepharose FF 介质,能一次制备800 mg 的标签蛋白,与AKTA 层析系统联用,能轻易的放大纯化规模,省去了装柱的时间。

 

 

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