GST标签蛋白的纯化

谷胱甘肽-S 转移酶(GST) 基因融合蛋白生产系统是表达、纯化和检测 E. coli 生产的GST 标签蛋白的多功能系统。GST 谷胱甘肽转移酶能特异的与谷胱甘肽结合，表现为酶和底物的作用原理，从而利用这个原理，将GST 做成标签表达出融合蛋白，与带谷胱甘肽配基的亲和介质特异性结合，从而纯化出目标蛋白，再用特异性的酶将GST 标签切除从而得到天然蛋白。GST 融合蛋白纯化的特点有：纯度高，纯化条件温和保持蛋白活性，促进蛋白可溶性表达。

一、Vector 系统

二、表达菌株高通量筛选的工具
MultiTrap FF，GST MultiTrap 4B

筛选工作可以用于高表达菌株的筛选，也可以用于筛选最佳的样品处理条件或者结合洗脱条件。

96 孔板预装GST MultiTrap FF
样品: 未澄清的E. coli BL21 裂解液含 GST-taggedhippocalcin,Mr 45 000
纯化方法: 根据说明书, 28-4070-75
样品体积: 500 μl
系统体积: 3×200 μl

结合缓冲液: 10–20 Mm PBS; 50–100 mM Tris-HCl; pH 6.2–8.0;140–400 mM NaCl; 0–5 mM DTT;0% to 5% glycerol and 0–2 mM glutathione.
洗脱缓冲液: 50 mM Tris-HCl, 10 mM reduced glutathione, pH 8.0
洗脱方法: 离心

三、应用于快速纯化标签蛋白的预装柱GSTrap FF

使用方便的预装柱结合注射器、泵或者色谱系统，GST 标签蛋白的纯化常常可以一步获得。

柱子： GSTrap FF 1 ml
样品： 8 ml 大肠杆菌可溶表达GST fusion protein 裂解液
结合缓冲液：PBS, pH 7.3
洗脱缓冲液：50 mM Tris-HCl,pH 8.0 加10 mM reduced glutathione
流速： 1 ml/min
纯化过程： 4 CV binding buffer, 8 ml sample, 10 CV binding buffer,
5 CV elution buffer, 5 CV binding buffer (CV = column volume)
洗脱： ÄKTAexplorer

用凝血酶柱上酶切纯化SH2-domain GST 融合蛋白
样品： 100 ml clarified E. coli extract expressing SH2-domain GSTtagged
protein (Mr 37 000)
柱子： GSTrap 5 ml
结合缓冲液：20 mM phosphate, 150 mM NaCl, pH 7.3
洗脱缓冲液：50 mM Tris-HCl, 10 mM reduced glutathione, pH 8.0
酶切： 20 U/ml Thrombin Protease for 14 hours at room
temperature
流速： 10 ml/min 上样和清洗，2.5 ml/min 洗脱
洗脱： ÄKTAexplorer 10