产品展示
世界生命科学领域中国科研仪器设备行业领军企业
The world leader
产品中心 Products
全国统一业务咨询热线:
020-3195 4003
全国统一商务咨询热线:
020-3195 4010






地址:广州市海珠区新港西路135号中大科技园A座1104室
传真:020-8411 5724
E-mail:cleversys@163.com
产品名称: 膜蛋白的纯化
产品名称:

膜蛋白的纯化

上市日期: 2016-03-10
  • 产品概述
  • 产品规格
  • 详细参数

膜蛋白质在基础生理过程( 如分子转运, 信号转导, 能量利用以及细胞核组织结构的维护) 具有极其重要的作用。基因组序列中大约有30% 的基因编码的是膜蛋白, 其中50% 是目前已知药物的靶点。膜蛋白一般由一个或多个跨膜片段构成. 其中跨膜的成分由单链的及成簇的α 螺旋或β 折叠结构组成, 相应的膜蛋白质则被称为α 螺旋膜蛋白或β 折叠膜蛋白。

膜蛋白纯化和分析都有很大的挑战,首先是膜蛋白很难制备大量,通常膜的体积只有细胞体积的0.3%,通过基因重组过表达来生产膜蛋白通常对细胞具有毒性,很难实现大规模的生产。常规的膜蛋白都是与细胞膜结合,要分离制备首先是用去垢剂将其溶解纯化,然后去除去垢剂人工构建磷脂双分子层,再进行功能和活性的研究。

 

一、膜蛋白纯化的通用工艺

 

QQ截图20160310135620.png

 

二、膜蛋白的纯化
目前重组过表达的形式生产膜蛋白是最常用的方法。而大部分膜蛋白都带有亲和的标签,his-tag 是最常用的标签。

对于膜蛋白表达的亲和标签:
• 连接在C 端,
• 如果是his-tag 用更长的标签8-10 个his。
• 在标签和蛋白之间插入酶切位点。

1、His MultiTrap ™可以用于膜蛋白表达的筛选
Dot-Blot 分析是常用于带标签的膜蛋白克隆株的筛选,FOSCholine-12 (FC12) 试剂溶解融合膜蛋白后,用his-tag 抗体进行免疫反应找出高表达菌株。

 

QQ截图20160310135743.png

 

2、细胞膜的分离:细胞破碎后通过离心和凝胶过滤技术都可以成功的将细胞膜从细胞碎片中分离出来。

 

QQ截图20160310135834.png

 

3、膜蛋白的溶解:它是整个膜蛋白制备过程中最关键的步骤。通过溶解过程,用去污剂将膜蛋白从它们所处的自然环境(脂膜)中提取至水溶性环境。去污剂可以打破脂双层,并将膜蛋白和脂类包裹进去污剂微胶束中。因此方便蛋白质的分离。

 

QQ截图20160310135944.png

 

4、放大纯化:从kit 找到的蛋白可以直接用histrap 1 ml/5 ml的预装柱放大纯化。
1) 亲和:

     柱子:HisTrap ™ HP 5 mL
2) 分子筛柱子:Superdex200 10/300 GL
             去垢剂:Dodecyl Maltoside
             去垢剂:Dodecyl Maltoside

 

QQ截图20160310140104.png

 

非标签蛋白的纯化

 

 QQ截图20160310140215.png

 

Copyright © 2005 - 2013 广州隆泽生物科技有限公司
犀牛云提供企业云服务
地址:广州市海珠区新港中路135号中大科技园A座1104室
电话: 86 020-31954003 020-31954010
邮箱:cleversys@163.com
邮编:330520