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产品名称: 疫苗的纯化
产品名称:

疫苗的纯化

上市日期: 2016-03-10
  • 产品概述
  • 产品规格
  • 详细参数

凡具有抗原性接种于机体可产生特异的自动免疫力,可抵御感染病的发生或流行,总称为疫苗。,以细菌制备的制剂称为“菌苗”,病毒及立克次氏体制备的制剂称为“疫苗”,以细菌代谢产物—毒素制备的制剂称为“类毒素”。

一、疫苗纯化平台
甲肝疫苗(HAV):
美国专利 (US Patent Number 5719049:Process forpurifyinghepatitis A virus) 报道,使用层析方法可以纯化甲肝疫苗。

 

QQ截图20160310144913.png

 

乙肝疫苗(HBV):
中国是乙型肝炎的高流行区,国家对乙肝疫苗的研发及生产很重视。1998 年停止生产血源型乙肝疫苗后,基因工程乙肝疫苗已经成为唯一的乙肝疫苗。现有乙肝疫苗分为CHO及酵母两种表达系统,均要采用层析技术纯化。

 

 

两种表达系统的乙肝疫苗使用了不同的疏水层析介质,是纯化的关键。


戊肝疫苗(HEV):
由昆虫杆状病毒表达的戊型肝炎病毒结构区ORF2 蛋白的戊肝疫苗在美国Novax 公司已经进入III 期临床(US
Patent6,054,567)。表达的重组蛋白采用Q Sepharose FF,SOURCE 15Q 离子交换层析及Superdex 200 p.g. 凝胶过滤层析得到纯化的戊肝疫苗。

狂犬病疫苗(Rabies Vaccine):
由于病毒培养液体积太大,不可能使用超离心方法,目前国内均使用超滤浓缩配合凝胶过滤Sepharose 4 FF 的方式纯化RabiesVaccine。样品上样量控制在柱床体积10%以下时,病毒的分离效果好,蛋白去除均在99% 以上,使用超过百次后,层析的重现性依然良好。

 

流行性感冒疫苗(Influenza Vaccine):
全病毒疫苗,有用单纯超离心以及层析法纯化的。层析法采用Sepharose 4 FF 凝胶,速度快,周期短,分离效果好,重复性高,适合大规模的制备。但全病毒疫苗的接种副反应较重,不利于大范围尤其是儿童和体弱者使用。在国际上,以裂解疫苗和亚单位疫苗为主。2003 年6 月17 日,FDA 批准了第一个流感疫苗鼻腔喷剂 (MedImmune 公司),更适合广大人群的使用。US Patent 6 245 532 描述了在重组流感病毒感染的昆虫细胞中表达多价血凝素疫苗及其层析纯化的方法:

 

QQ截图20160310145404.png

 

新一代病毒纯化介质Capto Core 700 是粒径85 um 的高流速琼脂糖微球,具有5 um 的惰性外壳,不带配基,在微球里面带有对蛋白等杂质有很强吸附能力的辛氨基。分子量大于700 k 的物质都不能进入到微球内,从流穿走,小分子被捕捉除去。Capto Core 对病毒不吸附,从而保护一些敏感的病毒的活性。具有分子筛和离子交换流穿模式的综合优点,能高效的纯化病毒,可以有效的去除卵清蛋白、宿主蛋白和DNA 片段。

 

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髓灰质炎疫苗(Polio Vaccine):
脊髓灰质炎疫苗是最早将层析技术用于生产的病毒性疫苗,1979 年就有文献报道。有感染活性的polivirus (A_from) pI为7.0,DNA 的pI 是2.0-2.5。在中性缓冲溶液中,病毒净电荷为零,而DNA 带有极强的负电荷易吸附到阴离子交换介质上,通过高盐DNA 才被洗脱下来。因此用阴离子交换技术纯化病毒,细胞基质DNA 及大部分杂蛋白均已清除,得到纯化的polivirus 疫苗。

 

流行性乙型脑炎疫苗(JEV):
乙脑病毒的分子量在400 万以上,与疫苗中的杂蛋白分子量相差较大,采用凝胶过滤层析可以纯化出符合要求的乙脑病毒疫苗,根据阴离子交换层析对DNA 去除具有很好的效果,因此跟在分子筛后面进一步去除残留的宿主DNA。

 

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森林脑炎疫苗(FEV):
森林脑炎病毒是一种以蝉类为主要传染源的自然疫源性疾病,病死率高达20%-30%。急性期症状消失后,常遗留麻痹性后遗症。目前生产的疫苗属粗制疫苗,其抗原含量低,杂蛋白多;且存在亚细胞成分等致敏性物质,致使疫苗注射剂量大,副反应增多或加重。为彻底解决这一问题,研制森林脑炎纯化疫苗是唯一可行的出路。浓缩的森林脑炎疫苗通过Sepharose 4 FF 层析,结果显示纯化疫苗去除了绝大部分牛血清蛋白和杂蛋白以及易致敏的地鼠肾细胞的亚细胞成分,使其应用更安全,可靠,是现有疫苗理想的换
代产品。

类病毒颗粒(Virus like particles):
使用灭活或减毒的病毒作为疫苗, 具有一定的感染几率;另一种预防策略是注射缺失核酸组份但仍含有病毒蛋白的病毒片段,也许还有脂双分子层。这些结构被称为类病毒颗粒或VLP。VLP 能够诱导强烈的免疫反应,但它们无法复制。因此,通过使用VLP 就没有感染的风险。此外,VLP 不需要高度免疫原性的佐剂。这使得VLP 非常有希望作为应用在生物制药上。VLP 可以通过基因重组技术生产。已经有两种基于VLP 的疫苗已经得到FDA 的批准。

 

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VLP 的分子量往往高于2000KDa,Sephacryl ™ S-500 HighResolution (HR) 的凝胶过滤适合VLP 组分的分离和分析,Sephacryl ™ S-500 High Resolution 分离的分子量范围在4 ×104 和2 × 107 之间。

 

 

 

 

 

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