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产品名称: 蛋白质筛选解决方案
产品名称:

蛋白质筛选解决方案

上市日期: 2016-02-25
  • 产品概述
  • 产品规格
  • 详细参数

自动化——成功的关键

开发目标重组蛋白的克隆、表达、纯化和结晶的高通量方案能显著缩短从基因到药靶的时间,而自动化则是成功的关键。自动化不仅提高了每个阶段的处理通量,也更可靠:最小限度的手工操作有效消除人为误差;实验结果更准确,也有更好的可重复性;自动化同时也提高了方案的可移植性,这对类蛋白质筛选的应用尤为重要。

 

从表达基因构建到目标蛋白质剖析

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上述工作流程是一个典型的蛋白质设计过程,其成功依赖于有效且高通量的蛋白质结构优化方案。这包括测定蛋白质表达水平、溶解性、产率、表达用标记切除、纯化缓冲液条件优化、均一性及纯度检测等等。

 

高度一致的结果

GE 医疗的MultiTrap™为蛋白质表达筛选提供三点突出优势:
• 高效的平行处理
• 高重现性
• 有效消除样本间的交叉污染

 

MultiTrap是预填充适当树脂的96孔过滤板,可用于蛋白质筛选或小量的蛋白质纯化分离。预填充的MultiTrap板拥有极高的孔间与板间再现性,能保证分离结果的一致性和可靠性。MultiTrap可用于评价不同表达构建以及表达系统的蛋白质发现水平差异,或是优化蛋白质筛选参数以提高例如蛋白质溶解性、回收率或蛋白质纯度。

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MultiTrap过滤板可通过离心或真空抽滤实现固液分离;样本无需前处理即可加入到MultiTrap过滤板(图1)中,因此准备样本需要的时间很短。

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典型的自动化处理可在60分钟内完成96个样本的纯化。

 

类似于标记蛋白质纯化应用,MultiTrap也可用于:

• 抗体纯化
• 免疫亲和法富集蛋白质
• 脱盐、缓冲液交换、蛋白质/碳水化合物分离

 

蛋白质筛选和纯化的自动化解决方案

Freedom EVO – 灵活的自动化平台

Freedom EVO®是一个灵活的全自动化液体处理工作台,能方便地地整合多种应用模块,实现重组蛋白质筛选和纯化的全自动处理,包括:
• 细胞转化、细胞裂解和样本制备
• 基于Te-VacS™真空分离模块的蛋白质纯化
• 离心分离
• 使用Infinite™ 200定量蛋白质浓度及分析结果
• 蛋白质晶体体系构建

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Infinite 200 Pro – 用途广泛的多功能检测系统

Infinite 200 Pro系列酶标仪是可实现6孔到384孔板、PCR板和比色杯的各种光谱学检测。Infinite 200 Pro系列酶标仪先进的荧光、发光和光吸收光学系统为所有的生命科学应用提供卓越的灵活性。根据需要,您可以选择灵敏度极高的基于四光栅™技术的M200型号,也可以使用专利的基于滤光片系统的F200型号。

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Freedom EVO和MultiTrap – 强强联手

Tecan Freedom EVO搭载GE医疗MultiTrap,全自动化的样本处理和过程管理使得目标蛋白质的纯化从MultiTrap平衡、样本添加、清洗和洗脱到分析的全过程一步完成,真正实现处理的可靠性、自动化、平行性和便捷性。

 

ÄKTAxpress – 无人值守的蛋白质纯化平台

一旦使用MultiTrap和Freedom EVO优化了蛋白质纯化条件,再使用ÄKTAxpress™放大就很容易了。ÄKTAxpress™可一次完成高达四种亲和性目标蛋白质的全自动化、多步骤纯化,每种蛋白质分别占用一个模块,并得到毫克级的高纯度蛋白质。一台电脑可以多台ÄKTAxpress模块,进一步提高处理通量。

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高重现性

搭载MultiTrap的全自动处理确保了纯化过程的高重现性。这也通过下述实验得到证实。在一台配备Te-VacS真空分离模块的Freedom EVO全自动工作站上应用His MultiTrap HP过滤板对含有histidine标记的绿色荧光蛋白((His)6-GFP, 分子量28000)的E. coli裂解液和histidine标记的麦芽糖结合蛋白((His)6-MBP, 分子量43800)的 E. coli裂解液的进行了全自动的蛋白质纯化。为检验自动化处理的可靠性与重现性,这两种裂解液在过滤板内被有意排列成棋盘式布局。回收蛋白质的定量通过集成的Infinite 200酶标仪测定280nm的光吸收测定。

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缓冲液条件的筛选

在一台配备离心机的Tecan Freedom EVO液体处理工作站上进行全自动缓冲液条件筛选,多达96种缓冲液条件的并行处理为优化目标蛋白质的最佳纯化条件提供了强有力的手段。

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蛋白质生产放大

使用由缓冲液筛选确定的最佳条件, 纯化平台从H i sMultiTrap FF扩大到HisTrap™ FF 1ml(ÄKTAxpress),相应的目标蛋白质的裂解液体积也从50μl放大到1ml,被放大了20倍。纯化回收后的蛋白质通过预填充凝胶超滤柱HiLoad™16/60 Superdex™ 200 pg进行二级分离,其结果见下。整个过程通过对ÄKTAxpress系统编程分两步进行,从凝胶超滤柱分离得到的洗脱峰可清楚地观察到单体、二聚物和三聚物的存在。

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最小化的交叉污染

搭载MultiTrap的全自动处理,同样可将纯化过程的孔间交叉污染风险抑制到最小。含histidine标记的增强绿色荧光蛋白((His)6 - EGFP,分子量28000)的澄清E. coli溶菌液和含histidine标记的激酶((His)6 -kinase,分子量43800) 的澄清E. coli溶菌液被有意地在MultiTrap过滤板中排列成棋盘样式,并经由搭载Te-VacS真空分离模块的Freedom EVO进行全自动分离纯化。回收的纯化蛋白的SDSPAGE分析表明,纯化过程没有明显的交叉污染。

 

高通量表达筛选和纯化

MAPKAP激酶(MK2, 分子量38000)是炎症通道中的一类关键酶,也是癌症治疗中一个极为重要的药靶。

高通量筛选

24个不同的histidine标记、去帽激酶变体基因在昆虫细胞体系(以获得合适的翻译后修饰)中进行表达,对其发现水平进行了筛选评估。相应的发现蛋白经纯化后应用于蛋白质结晶研究。配备Te-Vacs真空分离装置的的Tecan Freedom EVO液体处理工作站被用来纯化这些样本,纯化后的蛋白通过SDS-PAGE法进行分析。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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